Diluyentes para recuento de elementos figurados
Introducción
La imposición de rutinaria a la tarea de los recuentos hematológicos suele dar por sobreentendidas ciertas premisas que conviene recordar. Por tratarse de la obtención de resultados absolutos, en la hematimetría, más que en ninguna otra área de la bioquímica clínica, importa la exactitud de las mediciones volumétricas. En realidad, como se depende de material específico precalibrado, se podría decir que la máxima aspiración sería la realización de mediciones precisas, reproducibles. Las diluciones son tan altas que pérdidas pequeñas en la muestra configuran grandes diferencias en la dilución final. Y a esto se suma el cortejo de cuidados a tener con el perfecto mezclado de la muestra, llenado de la cámara, planitud de la mesa donde se apoye ésta, firmeza de sujeción de cubreobjetos, etc.
Para lograr este propósito, Biopur asocia a su Anticoagulante HQ -desarrollado especialmente para Hematología y Química Clínica- un conjunto de Diluyentes estudiados para cada elemento figurado de la sangre. Cada diluyente se caracteriza por su isotonicidad respecto únicamente al elemento sujeto a recuento. Los fijadores empleados en cada caso permiten resguardar las características morfológicas mucho tiempo después de realizada la dilución, por lo que los recuentos pueden efectuarse hasta muchas horas después de cargarse las pipetas.
Glóbulos Rojos
Composición
Para recuento de Glóbulos Rojos: 10X
Solución tamponada y estabilizada de las sales sódicas de los ácidos cítrico (340 milimolar) y clorhídrico (1,024 molar).
Empleo
Preparación de la Dilución de Uso
Diluir el contenido de cada frasco de 50 mL con 450 mL de agua destilada (por tratarse de una solución 10 veces concentrada). Mezclar. Estabilidad indefinida a temperatura ambiente.
Si se desea pueden prepararse menores volúmenes de dilución, es decir, tomar alícuotas de los 50 mL del contenido del envase y diluir apropiadamente con agua destilada.
En baja temperatura, el contenido de los frascos puede cristalizar. En ese caso llevar a 37°C hasta disolución.
Para realizar los recuentos de hematíes en cámara se utiliza el diluyente preparado según se indicó, siguiendo las técnicas convencionales.
La exacta isotonicidad del Diluyente y la absoluta inhibición de la autoaglutinación permiten la inmediata suspensión de los elementos figurados, la que se mantiene durante más tiempo que en caso de emplearse diluyentes convencionales. La importancia de la tonicidad y la capacidad buffer del Diluyente BIOPUR se refleja no sólo en la conservación del número y morfología de los hematíes, sino también en la adecuada separación entre elementos.
Glóbulos Blancos
Composición
Par a recuento de Glóbulos Blancos: 10X
Solución de los ácidos acético (5,19 molar) y clorhídrico (10 milimolar) adicionada de c.s. de azul de metileno.
Empleo
Preparación de la Cilución de Uso
Diluir el contenido de cada frasco de 50 mL con 450 mL de agua destilada (por tratarse de una solución 10 veces concentrada). Mezclar. Guardar en frasco de vidrio.
Estabilidad indefinida a temperatura ambiente.
Si se desea pueden prepararse menores volúmenes de dilución, es decir, tomar alícuotas de los 50 mL del contenido del envase y diluir apropiadamente con agua destilada.
Los recuentos se verifican con las técnicas convencionales desarrolladas al efecto.
Plaquetas
Composición
Solución estéril de p-aminobenzoato de dietilaminoetilo (85 milimolar) y cloruro de sodio (31 milimolar).
Este líquido se provee listo para usar y su conservación es indefinida en refrigerador (2 - 10° C).
El fundamento del método consiste en la producción de hemólisis por la utilización de un líquido hipotónico, y el mantenimiento de las plaquetas intactas y sin agrumar por la presencia de p-aminobenzoato de dietilaminoetilo.
Procedimiento par a el recuento de Plaquetas.
Antes de usar, llevar el Diluyente para recuento de Plaquetas Biopur a temperatura ambiente (15 - 32º C).
Medir sangre del pulpejo del dedo (o extraída con Anticoagulante HQ) hasta la marca 0,5 de una pipeta para recuento de leucocitos, y diluir hasta la marca 11 con Diluyente para recuento de Plaquetas Biopur. Mezclar y dejar en reposo 15 minutos. Volver a mezclar el contenido de la pipeta y cargar una cámara para recuento globular. Dejar en ambiente húmedo (cápsula de Petri con algodón humedecido) durante 15 minutos más. Contar las plaquetas de 25 cuadraditos mínimos, del retículo central que se emplea para recuento de glóbulos rojos. Las plaquetas aparecen redondeadas, refringentes y aumentadas de volumen por la hipotonía del Diluyente. Se favorece la observación imprimiendo un ligero movimiento al botón micrométrico del microscopio.
Cálculos
Multiplicar el número de plaquetas de los 25 cuadraditos por 3.200; el resultado es el número de plaquetas por milímetro cúbico.
El factor 3.200 al que nos hemos referido, proviene de los siguientes cálculos: 10 X 16 X 20 = 3.200, donde:
- factor 10 (altura de la cámara 0,1 mm)
- factor 16 (400/25) Superficie contada, 1/16 del total del retículo.
- factor 20 (dilución de la muestra en la pipeta)
Valores normales: 150.000 a 450.000 plaquetas por milímetro cúbico.
Importante
Si se utiliza sangre recogida con anticoagulante debe vigilarse que el frasco de recolección esté perfectamente limpio, lo mismo que el tapón, pues de lo contrario puede observarse aglutinación parcial de las plaquetas. Si se utiliza sangre del pulpejo debe procurarse recoger la muestra dejando que la sangre fluya libremente, sin hacer excesiva presión sobre el dedo.
La utilización de material siliconado (incluyendo pipetas) asegura excelentes resultados, especialmente en cuanto a reproducibilidad.
