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Introducción
La imposición de rutinaria a la tarea de los recuentos
hematológicos suele dar por sobreentendidas ciertas
premisas que conviene recordar. Por tratarse de la obtención
de resultados absolutos, en la hematimetría, más
que en ninguna otra área de la bioquímica
clínica, importa la exactitud de las mediciones volumétricas.
En realidad, como se depende de material específico
precalibrado, se podría decir que la máxima
aspiración sería la realización de
mediciones precisas, reproducibles. Las diluciones son tan
altas que pérdidas pequeñas en la muestra
configuran grandes diferencias en la dilución final.
Y a esto se suma el cortejo de cuidados a tener con el perfecto
mezclado de la muestra, llenado de la cámara, planitud
de la mesa donde se apoye ésta, firmeza de sujeción
de cubreobjetos, etc.
Para lograr este propósito, Biopur asocia a su Anticoagulante
HQ -desarrollado especialmente para Hematología y
Química Clínica- un conjunto de Diluyentes
estudiados para cada elemento figurado de la sangre. Cada
diluyente se caracteriza por su isotonicidad respecto únicamente
al elemento sujeto a recuento. Los fijadores empleados en
cada caso permiten resguardar las características
morfológicas mucho tiempo después de realizada
la dilución, por lo que los recuentos pueden efectuarse
hasta muchas horas después de cargarse las pipetas.
Glóbulos rojos
Composición.
Par a recuento de Glóbulos Rojos: 10X
Solución tamponada y estabilizada de las sales sódicas
de los ácidos cítrico (340 milimolar) y clorhídrico
(1,024 molar).
Empleo.
Preparación de la Dilución de Uso:
Diluir el contenido de cada
frasco de 50 mL con 450 mL de agua destilada (por tratarse
de una solución 10 veces
concentrada). Mezclar. Estabilidad indefinida a temperatura
ambiente.
Si se desea pueden prepararse menores volúmenes de
dilución, es decir, tomar alícuotas de los
50 mL del contenido del envase y diluir apropiadamente con
agua destilada.
En baja temperatura, el contenido de los frascos puede cristalizar.
En ese caso llevar a 37°C hasta disolución.
Para realizar los recuentos de hematíes en cámara
se utiliza el diluyente preparado según se indicó,
siguiendo las técnicas convencionales.
La exacta isotonicidad del Diluyente y la absoluta inhibición
de la autoaglutinación permiten la inmediata suspensión
de los elementos figurados, la que se mantiene durante más
tiempo que en caso de emplearse diluyentes convencionales.
La importancia de la tonicidad y la capacidad buffer del
Diluyente BIOPUR se refleja no sólo en la conservación
del número y morfología de los hematíes,
sino también en la adecuada separación entre
elementos.
Glóbulos blancos
Composición.
Par a recuento de Glóbulos Blancos: 10X
Solución de los ácidos acético (5,19
molar) y clorhídrico (10 milimolar) adicionada de
c.s. de azul de metileno.
Empleo
Preparación
de la Dilución de Uso
Diluir el contenido de cada frasco de 50 mL con 450 mL de
agua destilada (por tratarse de una solución 10 veces
concentrada). Mezclar. Guardar en frasco de vidrio.
Estabilidad indefinida a temperatura ambiente.
Si se desea pueden prepararse menores volúmenes de
dilución, es decir, tomar alícuotas de los
50 mL del contenido del envase y diluir apropiadamente con
agua destilada.
Los recuentos se verifican con las técnicas convencionales
desarrolladas al efecto.
Plaquetas
Composición.
Solución estéril de p-aminobenzoato de dietilaminoetilo
(85 milimolar) y cloruro de sodio (31 milimolar).
Este líquido se provee listo para usar y su conservación
es indefinida en refrigerador (2 - 10° C).
El fundamento del método consiste en la producción
de hemólisis por la utilización de un líquido
hipotónico, y el mantenimiento de las plaquetas intactas
y sin agrumar por la presencia de p-aminobenzoato de dietilaminoetilo.
Procedim iento par
a el recuento de Plaquetas.
Antes de usar, llevar el Diluyente para recuento de Plaquetas
Biopur a temperatura ambiente (15 - 32º C).
Medir sangre del pulpejo del dedo (o extraída con
Anticoagulante HQ) hasta la marca 0,5 de una pipeta para
recuento de leucocitos, y diluir hasta la marca 11 con Diluyente
para recuento de Plaquetas Biopur. Mezclar y dejar en reposo
15 minutos. Volver a mezclar el contenido de la pipeta y
cargar una cámara para recuento globular. Dejar en
ambiente húmedo (cápsula de Petri con algodón
humedecido) durante 15 minutos más. Contar las plaquetas
de 25 cuadraditos mínimos, del retículo central
que se emplea para recuento de glóbulos rojos. Las
plaquetas aparecen redondeadas, refringentes y aumentadas
de volumen por la hipotonía del Diluyente. Se favorece
la observación imprimiendo un ligero movimiento al
botón micrométrico del microscopio.
Cálculos
Multiplicar el número
de plaquetas de los 25 cuadraditos por 3.200; el resultado
es el número de plaquetas por milímetro cúbico.
El factor 3.200 al que nos hemos referido, proviene de los
siguientes cálculos: 10 X 16 X 20 = 3.200, donde:
* factor 10 (altura de la cámara 0,1 mm)
* factor 16 (400/25) Superficie contada, 1/16 del total
del retículo.
* factor 20 (dilución de la muestra en la pipeta)
Valores normales: 150.000 a 450.000 plaquetas por milímetro
cúbico.
Importante
Si se utiliza sangre recogida
con anticoagulante debe vigilarse que el frasco de recolección
esté perfectamente limpio, lo mismo que el tapón,
pues de lo contrario puede observarse aglutinación
parcial de las plaquetas. Si se utiliza sangre del pulpejo
debe procurarse recoger la muestra dejando que la sangre
fluya libremente, sin hacer excesiva presión sobre
el dedo.
La utilización de material siliconado (incluyendo
pipetas) asegura excelentes resultados, especialmente en
cuanto a reproducibilidad.
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